灵芝免疫药理研究进展
                                   中国人民解放军白求恩军医学院药理教研室    秦葵 钱彦丛

    灵芝药用在我国已有20O0多年的历史，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品。目前，已知灵芝属(Ganoderma )真菌约100余种，分布最广的为赤芝(G．lucidum)，其次为紫芝(G． japonicum)，还有树舌(G．applanatum)、松杉灵芝(G．tsugae)和簿树芝(G．capense)等均供药用。经过大量临床研究，灵芝对神经衰弱、高脂血症、冠心病心绞痛、心律失常、克山病、高原不适症、肝炎、出血热、消化不良、气管炎等各有不同程度的疗效。药理研究证明，灵芝有多方面的生物活性，现仅述其免疫调节作用的研究进展。

1 灵芝水煎提取制剂
    这是我国传统的临床用药方法，提取总的水溶性化学成分供研究其药理作用。 
1．1 免疫增强作用
    有学者研究结果，灵芝可明显提高绵羊红细胞(SRBC)引起的血凝抗体(HA—Ab)效价，表明其能促进特异性抗体产生；灵芝对刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾脏T细胞增殖和脂多糖(IYS)诱导的脾脏B细胞增殖均有促进作用，表明灵芝既能提高细胞免疫，又能增强体液免疫；灵芝能增加巨噬细胞(M )的吞噬活力，表明灵芝可促进非特异性免疫。研究还证明，灵芝有对抗环磷腺胺(CP)所致白细胞数量减少的作用，增加胸腺和脾脏的重量，增加M 的吞噬功能，因而提高小鼠非特异性免疫机能；明显促进小鼠外周血T淋巴细胞的非特异性酯酶染色率，表明其促进淋巴细胞向成熟T淋巴细胞转化，从而提高小鼠的细胞免疫功能；明显增加小鼠血清中溶血素的含量，表明其具有刺激B细胞分化增殖转变为浆细胞的功能，提高抗体水平，从而增强体液免疫功能。进一步研究发现灵芝能使溶血空斑数显著增多，表明其有提高B细胞生成IgM 抗体的能力而增强免疫功能。上海医科大学与日本和汉生药研究所合作，对灵芝热水提取物进行研究，在免疫药理学方面做了大量工作。认为灵芝能促进MΦ 吞噬功能，加速网状内皮系统对碳粒的清除。MΦ 是免疫系统最重要的细胞之一，在免疫应答与免疫调节过程中起着重要作用。灵芝能使活化的M Φ合成白细胞介素一1(IL一1)及肿瘤坏死因子(TNF)的量增加；也能恢复受抑制的淋巴细胞产生白细胞介素一2(IL一2)的能力。IL-1具有活化T或B细胞的作用，提高免疫功能；IL一2和TNF都是具有广泛生物活性的细胞因子，能从多方面调节免疫功能。同时研究还证明，灵芝能提高体内自然杀伤(NK)细胞活性，对因CP引起NK细胞活性的抑制有恢复趋势。NK细胞在机体的自然防御机制中占有重要地位，不仅与抗肿瘤有关，而且在抗微生物感染，尤其是病毒感染中起着重要作用。
1．2 免疫抑制作用
    灵芝具有增强与恢复免疫功能的一面，同时研究还证明在机体受到抗原刺激，免疫功能异常亢进时，灵芝还有抑制过高的免疫反应的一面，这就减少了自身因素造成的免疫损伤。有学者报道，灵芝能明显抑制豚鼠Forssman皮肤血管炎症反应，缓解Forssman休克的体征变化；还可使大鼠反向皮肤过敏反应的皮肤肿胀率显著减小。由此表明灵芝可抑制Ⅱ型变态反应。II型变态反应是免疫功能异常亢进造成的疾病，灵芝对其有较好的抑制作用，以减少疾病的发生。还有报道，灵芝可明显抑制接触性皮炎、Arthus反应及迟发型变态反应(DTH)，对反应素引起的大鼠被动皮肤过敏反应也有轻度抑制作用，由此说明灵芝对I、Ⅲ、Ⅳ型变态反应均有抑制作用。进一步研究发现，灵芝与适量CP合用，能使小鼠移植心肌存活时间比单用CP明显延长。以上结果证明灵芝对免疫功能亢进确有抑制作用。
综上所述，灵芝水煎提取制剂既有免疫增强及免疫恢复作用，又有抗变态反应的免疫抑制作用，明显体现出灵芝对机体免疫状态的双向调节作用。

2 灵芝发酵液
    发酵液与子实体相比具有生产时间短、费用低，含有大量灵芝多糖和有机锗等优点。有实验报道，灵芝发酵液能显著提高腹水型荷瘤小鼠NK细胞活性及淋巴细胞增殖率和血清TNF—α和NO含量。表明灵芝发酵液能较好地增强荷瘤小鼠免疫系统的活性。还有报道灵芝多糖锗对小鼠溶血素形成和溶血空斑形成有显著升高作用，对ConA、LPS诱导体外小鼠T、B淋巴细胞增殖有明显兴奋作用。证明灵芝多糖锗能显著增强体液免疫和细胞免疫 J。

3 灵芝孢子粉
    灵芝生长发育成熟产生大量的生殖细胞，即称灵芝孢子。因其颗粒极微小，搜集起来称为灵芝孢子粉。它的药用价值很高，颇受关注，对机体的免疫调节作用研究报道甚多。
3．1 免疫增强作用
    灵芝孢子粉对小鼠免疫功能影响的实验结果证实，给药小鼠的半数溶血值、血碳清除率、足跖厚差与正常小鼠比较差异显著，表明灵芝孢子粉能促进体液免疫和细胞免疫；对小鼠胸腺和脾脏指数的提高均非常显著，表明有增强免疫器官增殖的作用。萌动激活赤芝孢子粉对小鼠脾细胞IL一2分泌有明显促进作用，并能显著提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖，从而说明该孢子粉对免疫功能有显著增强作用。还有实验证明，灵芝孢子粉调节机体免疫功能是激活了特异性杀伤细胞(CIL)和非特异性自然杀伤细胞(NK)及淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)，提高其杀伤效能，从而抑制肿瘤细胞的增殖分化，发挥抗肿瘤作用。最近有报道灵芝孢子粉实验结果与前述大多一致，但未见对胸腺、巨噬细胞吞噬能力及淋巴细胞增殖能力有影响。
3．2 免疫抑制作用
    对灵芝孢子粉醇提物的水溶部分的研究结果证实，在体内能抑制小鼠迟发性过敏反应和对绵羊红细胞的初次抗体应答及鸡红细胞诱导的循环抗体水平；在体外可抑制有丝分裂原刺激小鼠脾淋巴细胞和人扁桃体淋巴细胞的增殖反应，提示灵芝孢子粉的某些化学成分有免疫抑制作用。

4 灵芝多糖
    它是灵芝的主要有效成分之一，具有很好的免疫调节作用。学者们普遍认为，灵芝多糖的免疫增强及免疫功能的恢复作用，主要依赖于两个方面实现：一是对细胞的直接作用，二是通过机体神经一内分泌一免疫系统调节作用。
4．1 对免疫细胞的作用
    (1)对T细胞的作用   灵芝多糖BN3A、BN3B及BN3C均能显著促进刀豆素(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应，可见灵芝多糖对T细胞增殖有促进作用。赤芝多糖GLA、GLB及GLC能明显促进小鼠混合淋巴细胞培养反应，且呈现剂量依赖性关系。表明其亦能明显促进T淋巴细胞的增殖，从而加速免疫应答过程。还有研究表明，灵芝多糖(BN3C)能明显促进小鼠脾细胞的增殖，对T细胞亚类的数量和功能、T细胞表面表型及细胞IL一2及B细胞产生溶血素抗体等均有促进作用，而剂量增大时呈现抑制作用，表明BN3C对T细胞及IL一2具有双向调节作用。
    (2)对B细胞的作用   成熟的B细胞膜相存在CD35(C3b受体)，灵芝多糖能提高其活性，促进B细胞活化，增强机体免疫功能。有研究证明，采用灵芝多糖作用过的红细胞做红细胞C3b受体花环率(RBC．C3bRR)试验，其花环形成率大大提高，说明灵芝多糖的作用可能与提高红细胞膜相CD35免疫活性有关。若采用CD35单克隆抗体阻断红细胞膜相CD35活性后，RBC．C3bRR明显下降，这进一步说明该多糖提高RBC．C3bRR是通过改变红细胞膜相CD35免疫活性而实现的。此表明灵芝多糖确能提高B细胞活性，增强免疫力。
    (3)对巨噬细胞的作用   灵芝菌丝体总糖(MGLP)作用于小鼠腹腔MΦ后，可明显增强培养上清中肿瘤坏死因子(TNF—α)的活性，诱导白血病细胞(HL一60)的凋亡，表明MGIP增强巨噬细胞的免疫功能。研究还发现灵芝多糖(GLB7)能迅速提高MΦ中三磷酸肌醇(IP3)浓度，明显促进MΦ中二酰基甘油(DAG)的合成，二者是激活MΦ的重要因子，使MΦ发挥其免疫作用。进一步研究证明，GLB7能引起小鼠腹腔MΦ中环磷腺苷(cAMP)浓度快速升高，从而使蛋白激酶(PKA)活化，再激活MΦ，提高免疫效能。这可能是GLB7增强机体免疫功能的重要途径。
    (4)对淋巴因子激活的杀伤细胞作用   灵芝多糖(GLP)能直接刺激人脐血单核细胞(CBMC)增殖，并能协同植物血凝素(PHA)刺激CBMC增殖。在rIL一2诱导人脐血淋巴因子激活的杀伤细胞(CB—LAK)早期加入GLP，能明显增强CB—LAK细胞增殖活性。GLP本身不能诱导CBMC的IL一2R的表达，但能协同rIL一2提高CB—LAK细胞表面IL一2R的表达，并刺激CBMC分泌IL一6，增强细胞脂多糖(LPS)的诱生作用，从而明显增强人脐血LAK细胞的杀伤活性。由此说明灵芝多糖是一种生物反应调节剂，提高机体细胞免疫功能。
4．2 对细胞因子及DNA RNA的影响
    灵芝多糖能引起脾细胞核DNA、RNA含量增加，细胞内超微结构变化，细胞质和核的平均截面积明显增加，核质比下降。提示灵芝多糖能诱导脾细胞DNA和蛋白质的合成，促进免疫细胞增殖，加速免疫应答过程。GLB7能促进小鼠脾细胞原代培养时IL一1α及TNFαmRNA的表达，从而促进IL一1及TNFα的合成与分泌；同时也能促进IL一2及IL一3mRNA的表达，增强IL一1和IL一3的合成与分泌。IL一1有活化T或B细胞作用，IL一2能活化杀伤细胞，IL一3对多种细胞的分化成熟具有调节作用，TNF是启动抗菌炎症反应的细胞因子，引起白细胞在炎症部位的聚集。因此，GLB7能增强机体的免疫功能。还有学者在健康人外周血单核细胞或T淋巴细胞培养培养中加入灵芝子实体多糖(PS—G)，可明显促进MΦ生成IL一1β、TNFα和IL一6以及T淋巴细胞生成IFNγ(干扰素γ)。说明灵芝多糖确能直接作用于MΦ和T淋巴细胞，促进其产生TNFα和IFNγ等细胞因子，抑制肿瘤细胞或促其凋亡，提高机体免疫功能。
4．3 对免疫功能的恢复作用
    研究发现氟尿嘧啶、丝裂霉素C和阿糖胞苷均可使混合淋巴细胞培养反应(MLR)抑制率达50％左右，GLB可剂量依赖性拮抗上述抗肿瘤药对MLR的抑制作用，直至使MLR恢复正常水平。CP可显著抑制红细胞致敏小鼠的空斑型细胞反应，松杉灵芝多糖及松杉灵芝发酵多糖灌胃可分别使空斑型细胞反应恢复正常。环磷酰胺可显著抑制二硝基氯苯所致小鼠迟发型过敏反应，松杉灵芝多糖及松杉灵芝发酵多糖灌胃均可使受抑制的迟发型过敏反应恢复正常。

5 灵芝蛋白
    文磊等报道，从灵芝菌丝体中提取一种新的分子量为12．42kD的免疫调节性蛋白一灵芝－8(LZ－8)。实验证明，纯化的LZ-8对SRBC具有凝集活性，对小鼠脾淋巴细胞和人外周血淋巴细胞有类似植物血凝素(PHA)样的促有丝分裂原活性，但不是一种PHA。LZ-8能完全抑制牛血清蛋白(BSA)诱导的小鼠系统性过敏反应，也能使BSA诱导的小鼠Arthus阳性反应率从90％降至40％。 LZ-8可通过调节粘附子而促进细胞间相互作用，显著增强IFN7诱导的血管内皮细胞和U937细胞之间的相互粘合，并促进T细胞与SRBC的玫瑰花结形成。上述表明LZ-8具有免疫调节作用。近来，有学者从灵芝子实体和破壁孢子粉中分离出三种灵芝蛋白，分别命名为LZP-1、LZP-2和LZP-3，其相对分子量分别为67 000、43 000和45 700。经体外实验，用量均为50ug•ml-1时，灵芝孢子粉的LZP一2和LZP一3促进淋巴细胞增殖率分别高达(41．3±3．1)％和(38．7±4．8)％ ，且呈现出一定的剂量依赖效应，而灵芝子实体的LZP一1促进淋巴细胞增殖率较低，为(18．2±3．9)％ 。该研究表明，灵芝蛋白有可能是灵芝具有免疫调节活性的成分之一，具有潜在的临床应用价值。

    总之，灵芝水煎提取制剂、灵芝发酵液、灵芝孢子粉、灵芝多糖及灵芝蛋白等，对机体免疫增强与恢复作用是主要的，但也有免疫抑制作用的一面。其作用机制有些方面已经清楚，但有很多因素尚待进一步深入探讨。就目前研究结果看，基本揭示出灵芝“滋补强壮，扶正固本”的基本原因及历代医药家视为神奇珍品的道理所在。

    来自《解放军药学学报》