猴头菇多糖的免疫调节作用
                            浙江中医学院 徐杭民 谢志慧 张蔚羽 广东太阳神集团公司科研中心 蒋为荤

【摘要】应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测细胞的代谢活性厦增殖反应。实验结果显示， 猴头菇多糖对由刀豆球蛋白(Con A)活化的小鼠胸腺细胞(前T 细胞)有较强的促进增殖的作用， 其OD值为单独使用刀豆球蛋白A的2倍以上； 在脾脏淋巴细胞培养中， 单独使用猴头菇多糖可以显著地促进细胞的增殖， 其作用较对照组明显。 对脂多糖(LPS)刺激的B细胞也有协同作用。

    猴头菇(Hericium erinaceus)属担子菌纲， 多孔菌目齿菌科。其性平、味甘， 利五脏。据报道， 猴头菌的有效成份为多糖和多肽类物质， 水解后的糖部分经薄层层析， 鉴定为葡萄糖， 阿拉伯糖和木糖等。体外实验发现，它有抑制艾氏腹水癌(EAC)细胞DNA 和RNA 的合成作用。临床已证明， 猴头菇菌及其菌丝体治疗慢性胃炎的总有效率达96．3％，胃及十二指肠溃疡总有效率为93%，特别是胃镜像及病理好转率达77.4％ ， 本文采用四甲基偶氨唑蓝(M TT)，[3(4．5一dime—thylthiazol一2一y1)2．5一dipheny I terazalium bromide)法在体外观察了猴头菇多糖及其协同刀豆球蛋白A(Con A)、脂多糖(LPS)对小鼠T、B淋巴细胞的影响。

材料与方法

1 实验材料

    实验动物，均为雄性NlH 小鼠，6-8周龄，体重为18-22g，由浙江省实验动物中心供应；猴头菇多糖(polysaccharides Isolated from the Hericium erinaceus Pers．简称 PHEP)，由广东太阳神集团公司提供口服液， 经本校中药系化学教研室提取， 多糖含量为55％ 。其他实验材料来源是：MTT， 瑞士Fluka公司生产， 批号为N0．88415；RPM1-1640， 美国GIBCO公司生产；LPs，中国第二军医大学产品， 批号为NO．89012；96孔平底培养板， 丹麦NUNC公司产品。

2 胸腺细胞(前T细胞)增殖反应

    参考MOS．Mann方法稍加改进。无菌摘取胸腺， 剔除周围脂肪， 剪碎组织， 置钢性细胞筛挤压， 同时用含有10％FCS(小牛血清)的培养基(RPMI-1640， 每毫升含100u的青霉素G和100ug的链霉素以及3ug的二性霉素B， 美国GIBC0公司产品)冲洗． 制成单个胸腺细胞悬液， 洗涤2次(1500 r／min．5min)，重悬细胞，将细胞浓度调整至1×107 ／ml，并加入96孔平底培养板， 每孔100 ul， 再加入各样品， 每孔100ul，使每孔的总体积为200ul，重复3份。置5％CO2 ／95％ 空气(无菌)，37℃细胞培养箱培养72h,在培养结束前4h， 加入MTT [PH 6.9， 磷酸盐缓冲液(PBS)配制]每孔10ul， 使终浓度达到0.5mg／ml，继续培养4 h。终止培养后， 用96孔平板离心机离心(1500 r／min,10min)， 弃上清，经PBS洗涤1次后，每孔加入100ul含0.04mol／L HC1的酸化异丙醇(50 ml异丙醇+浓HC1 0.167 m1)， 振荡(微型振荡器)约5~10min后，用DG—II型酶联免疫检测仪， 测定各样品光密度OD值， 选择波长为570nm 和630nm(参考波长)。

3．脾脏淋巴细胞的增殖反应

    参考Mosmann方法稍加改进。无苗取脾脏，制成单个细胞悬液，并采用低渗法破坏红细胞， 洗涤后，重悬细胞， 将细胞浓度调整至5×106 /ml。操作步骤与胸腺细胞增殖反应相同。

结 果

l  胸腺细胞(前T细胞)增殖反应

    猴头菇多糖不同剂量与Con A 联台使用时，对小鼠胸腺细胞有显著的促进增殖作用。当Con A浓度在2ug／ml时(n=3,下同)， 加入猴头菇多糖浓度为0、0.78、1.56、 3.12、6.25、12.5 25ug／m1， 胸腺细胞增殖的OD值分别为：0.14±O.01、0.15±0.01、0.17±0.02、0.20± 0.0l、0.25± 0.02 、0.35± 0.03 、0.44±0.01 (与对照组相比较， P <0.05， ¨P <0.01)。当单独使用猴头菇多糖(同上各浓度，n=3，对照组)时均未显示促进作用。猴头菇多糖协同Con A对胸腺细胞增殖有促进作用，并随多糖浓度的提高而增强。

2 脾脏淋巴细胞的增殖反应 见附表。

    单独使用猴头菇多糖，对脾脏淋巴细胞有显著的促进增殖的作用。但对由LPS激活的B淋巴细胞增殖， 猴头菇多糖未见有协同作用。

        

讨 论

    对由Con A 引起活化的T 淋巴细胞， 猴头菇多糖(PHEP)有显著的促进其增殖的作用。然而，这是一个协同作用，其协同作用只有在Con A存在的条件下，才能得到体现，而单独用各种浓度的猴头菇多糖并不能使T 淋巴细胞增殖。这可能是与药物作用于细胞的周期不同有关。在单独使用猴头菇多糖肘，脾脏混合淋巴细胞的增殖作用得到了显著的提高， 这从某种意义上来看， 要比协同Con A 促进前T细胞增殖的作用更为重要。脾脏淋巴细胞均为成熟的， 具有功能性的细胞， 比如在脾脏中的T 细胞，它已完成抗原识别受体的基因重排及分子表达， 使细胞自身具备识别外来抗原，并应答和自身抗原耐受的能力。这对于机体抵御疾病和康复，有着重要的意义。

    摘自《中国中西医结合杂志》